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点击次数:36 发布时间:2024/7/15 13:41:37
小鼠纤维素酶(CE)elisa试剂盒代测实验步骤有哪些?
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小鼠纤维素酶(CE)elisa试剂盒代测(酶联免疫吸附试验法)使用说明书
仅供体外研究使用,不用于临床诊断!
产品规格:96T/48T(可拆)
产品数量:咨询
产品应用:ELISA实验
产品货期:现货
有效期:6个月
保存条件:2-8℃
本公司的ELISA试剂盒,品质高,灵敏度好,曲线漂亮,无效包退包换,还可提供免费代测服务,各种种属、各种系列ELISA科研实验检测试剂盒,详情可来电咨询我公司销售人员或咨询我公司在线客服QQ。
[样本处理及要求]
1、血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2、血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3、组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4、细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
[试剂准备]
小鼠纤维素酶(CE)elisa试剂盒代测从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
[操作步骤]
1、从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2、设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3、样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4、除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5、弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7、每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
[操作步骤]
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照随货说明书中图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。(小鼠纤维素酶(CE)elisa试剂盒代测)
[售后]
试剂盒售后:本公司出售的试剂盒均保质保量,质量问题均可免费退换,另提供免费代测服务。
★立足于科研沿,主营ELISA试剂盒、抗体或抗原、血清、培养基等等各种科研试剂,满足各大院校以及研究机构在生物域的科研需求。
★完善的实验技术开发平台,和成熟的试剂研发系统,并熟练掌握了各种酶联技术。
★产品具有较强的稳定性和较高的准确性。
★ 面向学院、研究所、医院、卫生防疫注于生物技术研发的公司等单位的广大客户。
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原创作者:上海双赢生物科技有限公司
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